ERBA Protime LS Series Quick Start Manual

e-mail: [email protected], www.erbamannheim.com N/148/17/D/INT Date of Revision: 17 .8. 2017 QUALITY SYSTEM CERTIFIED ISO 9001 ISO 13485 Erba Protime LS Prothrombin Time Cat. No. Pack name Packaging (Content) EHL00023 Erba Protime LS 4 2 x 2 ml EHL00024 Erba Protime LS 10 2 x 5 ml EHL00046 Erba Protime LS 50 10 x 5 ml EHL00047 Erba Protime LS 100 10 x 10 ml IVD INTENDED USE Erba Protime LS is a liquid ready to use rabbit brain thromboplastin intended for the determination of the prothrombin time (PT). CLINICAL SIGNIFICANCE Erba Protime LS thromboplastin is a rabbit brain extract, which contains tissue factor, lipids and calcium ions. The first standardized one-stage prothrombin time test was developed by Dr. Armand Quick in 1935. It has now become the basic coagulation screening test for the diagnosis of congential and acquired deficiencies of clotting factors from the extrinsic pathway (factors II, V, VII and X). It is also used for the induction and monitoring of oral anticoagulant therapy and can be used to assess the protein synthesis capability of the liver in chronic or acute hepatic disorders. Therefore, the PT by Erba Protime LS is optimally used for presurgical screening and monitoring for oral anticoagulant therapy (OAT) also. Erba Protime LS reagent with the corresponding deficient plasmas is also suitable for determination of activity of extrinsic coagulation pathway (factor II, V, VII and X). PRINCIPLE The one-stage PT measures the clotting time of plasma after adding a source of tissue factor (thromboplastin) and calcium. The recalcification of plasma in the presence of tissue factor generates activated factor Xa. Factor Xa in turn activates prothrombin to thrombin, which converts fibrinogen to an insoluble fibrin clot. The time of this clotting process is measurable manually or with optical or mechanical coagulation analysers. COMPOSITION Erba Protime LS is a tissue thromboplastin from rabbit brain, which contains calcium ions and sodium azide (<0,01%) as preservative WARNINGS AND PRECAUTIONS  For in vitro diagnostic use only. These reagents are to be used by certified medical laboratory personnel only.  Do not ingest.  Wear gloves when handling all kit components.  Only use clean or single use laboratory equipment to avoid contaminations.  The eventual rest of reagents should be disposed of in accordance with the internal regulations and in compliance with local and national regulations relating to the safe handling of waste. WARNING - POTENTIAL BIOHAZARDOUS MATERIAL Some reagents provided in these kits contain materials of human and/or animal origin. Whenever human plasma is required for the preparation of these reagents, the plasmas are tested for the antibodies to HIV 1. HIV 2 and HCV, and for hepatitis B surface antigen. and results are found to be negative. However, no test method can offer complete assurance that infectious agents are absent. Therefore, users of reagents of these types must exercise extreme care in full compliance with regulatory safety precautions in the manipulation of these biological materials as if they were infectious. WORKING REAGENT Erba Protime LS is ready to use. The contents of the vial should be mixed well before use (5 minutes). Using of stirring bar is necessary! STABILITY AND STORAGE The unopened reagents are stable till the expiry date stated on the bottle and kit label when stored at 2–8°C. Opened vials are stable: - 2 months at 2-8°C - 5 days at 15°C - 6 hours at 37°C Do not freeze. SAMPLE COLLECTION AND PREPARATION Plastic or siliconised glass should be used throughout. Blood (9 parts) should be collected into 3.2% or 3.8% sodium citrate anticoagulant (1 part). Separate plasma after centrifugation at 1500 x g for 15 minutes. Plasma should be kept at 18-24°C. Testing should be completed within 4 hours of sample collection, or plasma can be stored frozen at -20°C for 2 weeks or -70°C for 6 months. Thaw quickly at 37°C prior to testing. Do not keep at 37°C for more than 5 minutes. PROCEDURE Erba Protime LS is a one-stage PT test which can be used with semi-automated coagulation analysers according to the protocol detailed below. Manual Method  Mix sufficient Erba Protime LS reagent to complete the anticipated testing for the day and incubate reagent at 37°C no more than 4 hours  Add 50 µl of the patient plasma or control plasma into a reaction tube and incubate at 37°C for 2 minutes.  Add 100 µl of freshly mixed reagent and start simultaneously a timer.  Note the time for clot formation to the nearest 0.1 seconds Automated Method Refer to the instrument’s operator’s manual. INTERPRETATION OF RESULTS Erba Protime LS test results can be reported in the following units, lot specific sheet in the box will help in the calculation: 1. Seconds, which means the observed clotting time. 2. Percentage, which means the proportional part of the normal PT activity, which is calculable from the calibration curve. Method dependent master curve in the issued sheet can be used for the calculation. 3. International Normalized Ratio (INR), calculated as INR=(PT/MNPT)ISI. Where PT means the clotting time of the sample, MNPT means Mean Normal Prothrombin Time and ISI means International Sensitivity Index. The ISI method dependent values in the lot specific values sheet can be used for the calculation. - The INR is the only officially recognized dimension of the result at vitamin K antagonists treated patients. The normal range expressed in INR is 0,8-1,2. - Every laboratory should determine its own MNPT value and reference range. MNPT value in the issued sheet is only for information, because it depends on the measuring circumstances and population. - Accurate and general conversion of percentage into INR (or back) is not possible! REFERENCES VALUES Reference values can vary between laboratories depending on the techniques and systems in use. For this reason each laboratory should establish its own reference ranges. This is particularly important for local ISI calibration. Using an optical coagulation analyzer, normal values ranging from 11.5-14.6 seconds; 0.93-1.16 INR; 79.1-112.8 %PT are typical. QUALITY CONTROL Each laboratory should establish a quality control program. To ensure adequate quality, control plasmas are recommended. It is suggested to use two levels of control, one close to the normal patient values (Erba Control N, Cat. No.: EHL00014 or Erba Control N Plus, Cat. No.: EHL00016) and the second representative the pathologic values (Erba Control P, Cat. No.: EHL00015 or Erba Control P Plus, Cat. No.: EHL00017). LIMITATIONS Erba Protime LS is insensitive to the following substances: Heparin: up to 2 IU/mL Bilirubin: up to 0.5 g/l Heamoglobin: up to 10 g/l Triglycerides: up to 3.75 g/l PERFORMANCES These performances have been obtained using ECL coagulation analyzer. Results may vary if a different instrument or manual procedure is used. Precision Intra-assay precision (N = 20) Inter-assay precision (N = 10) Mean (s) 12.4 25.6 12.7 24.8 CV (%) 0.49 1.46 2.18 1.95 REFERENCES 1. Quick AJ (1935) A Study of the Coagulation Defect in Hemophilia and Jaundice, Am. J. Med. Sci, 190: 501. 2. Biggs R (1976) Human Blood Coagulation, Haemostasis and Thrombosis, 2nd Edition, Blackwell Scientific Publications, London. 3. Hirsh J, Poller L, Deykin D, Levine J, Dalen JE (1989) Optimal Therapeutic Range for Oral Anticoagulants, Chest, 95: 5S-11S. 4. Poller L (1986) Laboratory Control of Anticoagulant Therapy, Sem. Thromb. Haemostasis, 12: 13-19. 5. World Health Organisation (1984) Expert Committee on Biological Standards, Technical Series, 700: 19. 6. Clinical and Laboratory Standards Institute (2008) Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and Molecular Haemostasis Assays: Approved Guideline, 5th edn. CLSI: H21-A5. 7. Poller L., Triplett DA, Hirsh J, Carroll J, Clarke K (1995) The value of plasma calibrants in correcting coagulometer effects on International Normalised Ratios (INR): An international multicentre study, Amer. J. Clin. Pathol, 103: 358-365. 8. Poller L, Triplett DA, Hirsh J, Carroll J, Clarke K (1995) A comparison of lyophilised artificially depleted plasmas and lyophilised plasmas from warfarin treated patients in correcting for coagulometer effects on International Normalised Ratios, Amer. J. Clin. Pathol, 103: 366-371. 9. Keeling D (2011) Guidelines on Oral Anticoagulation with warfarin: Forth Edition, British Journal of Haematology, 154(3): 311-324. USED SYMBOLS REF Catalogue No CE Mark - Device comply with the Directive 98/79/EC LOT Batch Code IVD In Vitro Diagnostics Expiry Date (Last day of the month) Consult Manufactured by Storage temperature Instruction for Use Erba Protime LS Product Name CONT Content

e-mail: [email protected], www.erbamannheim.com N/148/17/D/INT Date of Revision: 17 .8. 2017 QUALITY SYSTEM CERTIFIED ISO 9001 ISO 13485 Erba Protime LS Protrombinový čas Kat. č. Název balení Obsah balení EHL00023 Erba Protime LS 4 2 x 2 ml EHL00024 Erba Protime LS 10 2 x 5 ml EHL00046 Erba Protime LS 50 10 x 5 ml EHL00047 Erba Protime LS 100 10 x 10 ml IVD POUŽITÍ Souprava Erba Protime LS je kapalný (ready to use) tromboplastin z králičích mozků, určený ke stanovení protrombinového času (PT). KLINICKÝ VÝZNAM Erba Protime LS tromboplastin je extrakt z králičího mozku, který obsahuje tkáňový faktor, lipidy a ionty vápníku. První standardizovaný jednostupňový test na stanovení protrombinového času byl vyvinut Dr. Armando Quickem v roce 1935. V současnosti patří k základním screeningovým koagulačním testům pro diagnostiku vrozených a získaných deficiencí faktorů vnější cesty aktivace přeměny protrombinu na trombin (faktory II, V, VII a X). Je rovněž používán při zavedení a dále k monitorování orální antikoagulační terapie a může být rovněž použit pro posouzení syntézy proteinů v játrech při chronickém nebo akutním onemocnění jater. Souprava je zvláště vhodná pro předoperační vyšetření a pro monitorování orální antikoagulační terapie (OAT) a ve spojení s vhodnou deficientní plazmou pro měření aktivity faktorů vnější dráhy (faktory II, V, VII and X). PRINCIP METODY Jednostupňový PT test měří koagulační čas plazmy po přidání zdroje tkáňového faktoru (tromboplastinu) a vápníku. Rekalcifikace plazmy v přítomnosti tkáňového faktoru generuje vznik aktivovaného faktoru Xa. Aktivovaný faktor Xa následně aktivuje přeměnu protrombinu na trombin, který konvertuje fibrinogen na nerozpustnou fibrinovou sraženinu. Čas tohoto srážecího procesu se měří buď manuálně nebo pomocí optických či mechanických koagulačních analyzátorů. SLOŽENÍ ČINIDEL Erab Protime LS je tkáňový tromboplastin z králičích mozků, obsahující vápenaté ionty a azid sodný (<0,01%) jako konzervant. UPOZORNĚNÍ A BEZPEČNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY  Pouze pro in vitro diagnostiku. S těmito činidly mohou pracovat pouze odborně způsobilí laboratorní pracovníci.  Zabraňte požití.  Pokud pracujete se soupravou, používejte ochranné rukavice.  Abyste zabránili kontaminaci, používejte čisté nebo jednorázové laboratorní  Případné zbytky činidel je nutno likvidovat podle vlastních interních předpisů v souladu se Zákonem o odpadech. VAROVÁNÍ – BIOLOGICKÉ RIZIKO Některá činidla, která jsou součástí této soupravy, obsahují látky lidského a/nebo živočišného původu. Vždy, když je k přípravě těchto činidel vyžadována lidská plazma, je testována na přítomnost protilátek proti HIV 1, HIV 2 a HCV a na HBsAg a tyto výsledky jsou negativní. Nicméně žádná testovací metoda neposkytuje absolutní jistotu, že infekční agens nejsou přítomna. Proto musí být všichni pracovníci při práci s tímto biologickým materiálem mimořádně opatrní a pracovat zcela ve shodě s platnými bezpečnostními opatřeními jako by se jednalo o infekční materiál. PŘÍPRAVA PRACOVNÍCH ROZTOKU Erba Protime LS je připraven k použití. Obsah lahvičky před použitím dobře promíchejte (5 minut). Je nutné použití míchadla! SKLADOVÁNÍ A STABILITA PRACOVNÍCH ROZTOKU Neotevřená činidla, skladovaná při 2-8°C, jsou stabilní do data exspirace uvedeného na štítku. Po otevření je činidlo stabilní: - 2 měsíce při 2-8°C - 5 dní při 15°C - 6 hodin při 37°C Nezamrazujte. ODBĚR A PŘÍPRAVA VZORKU Při práci používejte plast nebo silikonizované sklo. Krev (9 objemových dílů) odeberte do 3,2% citrátu sodného (1 objemový díl), který působí jako antikoagulant. Centrifugujte 15 minut při 1 500 x g a odseparujte plazmu. Plazmu skladujte při teplotě 2-8°C nebo 18-24°C. Stanovení by mělo být provedeno do 4 hodin po odběru vzorku, plazma může skladována při teplotě -20°C po dobu 2 týdnů nebo při teplotě - 70°C po dobu 6 měsíců. Před stanovením plazmu rychle rozpusťte při 37°C. Plazmu nenechávejte při teplotě 37°C maximálně 5 minut 6. POSTUP MĚŘENÍ Erba Protime LS je jednostupňový PT test, který může být použit na polo-automatickém koagulačním analyzátoru dle níže uvedeného postupu. Manuální metoda  Činidlo Erba Protime LS dobře promíchejte, odeberte dostatečné množství pro denní potřebu, činidlo temperujte při 37°C, ne déle než 4 hodiny  Do kyvety – zkumavky napipetujte 50 µl pacientské plazmy nebo kontrolní plazmy a temperujte 2 minuty při 37°C.  Přidejte 100 µl promíchaného činidla a současně spusťte stopky.  Zaznamenejte čas nutný pro vytvoření koagula s přesností na 0,1 sekundy. Automatická metoda Postupujte podle informací uvedených v Uživatelském manuálu. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ Výsledky mohou být uvedeny v následujících jednotkách, specifikace šarže je součástí balení: 1. Sekundy, vyjadřují čas srážení. 2. Procenta, vyjadřují proporcionální část normální aktivity PT, která se vypočítá z kalibrační křivky (%PT kalibrační plazmy proti změřenému času nutnému pro vznik koagula). 3. International Normalized Ratio (INR), vyjadřuje poměr času srážení pacientské plazmy a času srážení průměrné normální plazmy (MNPT) umocněný Mezinárodním Indexem Senzitivity (ISI), INR=(PT/MNPT)ISI. Hodnota ISI je uvedena v návodě a je závislá na použité metodě a šarži. - Normální rozsah INR je 0,8 – 1,2. - Každá laboratoř by si měla stanovit vlastní hodnoty MNPT a referenční rozmezí. - Převody z procent na INR (nebo zpět) nejsou možné REFERENČNÍ HODNOTY Referenční hodnoty se mohou mezi laboratořemi lišit v závislosti na použitém systému měření. Proto by si každá laboratoř měla stanovit své vlastní rozmezí referenčních hodnot. To je zvláště důležité pro stanovení ISI. Při použití optického koagulačního analyzátoru se pohybují normální hodnoty v rozmezí 11.5-14.6 sekund; 0.93-1.16 INR; 79.1-112.8 %PT. KONTROLA KVALITY Každá laboratoř by si měla založit vlastní program kontroly kvality. Pro zajištění odpovídající kvality stanovení je doporučeno použít kontrolní plazmu. Je doporučeno použít dvě hladiny kontrolní plazmy, jednu v oblasti normálních hodnot pacientů (Erba Control N, kat. č. EHL00014 nebo Erba Control N Plus, kat. č. EHL00016) a druhou představující patologické hodnoty (Erba Control P, kat. č. EHL00015 nebo Erba Control P Plus, kat. č. EHL00017). OMEZENÍ Heparin: neovlivňuje stanovení do koncentrace 2 U/mL. Bilirubin: neovlivňuje stanovení do koncentrace 0,5 g/l. Hemoglobin: interference nejsou pozorovány do koncentrace 10 g/l. Triglyceridy: neovlivňují stanovení do koncentrace 3,75 g/l. VÝKONNOSTNÍ CHARAKTERISTIKY Tyto výkonnostní charakteristiky byly získány na analyzátoru ECL. Výsledky se mohou lišit v případě použití jiného přístroje nebo manuální metody stanovení. Přesnost Intra-assay (N = 20) Inter-assay precision (N = 10) Střední hodnota (s) 12.4 25.6 12.7 24.8 CV (%) 0.49 1.46 2.18 1.95 LITERATURA 1. Quick AJ (1935) A Study of the Coagulation Defect in Hemophilia and Jaundice, Am. J. Med. Sci, 190: 501. 2. Biggs R (1976) Human Blood Coagulation, Haemostasis and Thrombosis, 2nd Edition, Blackwell Scientific Publications, London. 3. Hirsh J, Poller L, Deykin D, Levine J, Dalen JE (1989) Optimal Therapeutic Range for Oral Anticoagulants, Chest, 95: 5S-11S. 4. Poller L (1986) Laboratory Control of Anticoagulant Therapy, Sem. Thromb. Haemostasis, 12: 13-19. 5. World Health Organisation (1984) Expert Committee on Biological Standards, Technical Series, 700: 19. 6. Clinical and Laboratory Standards Institute (2008) Collection, Transport and Processing of Blood Specimens for Testing Plasma-Based Coagulation Assays and Molecular Haemostasis Assays: Approved Guideline, 5th edn. CLSI: H21-A5. 7. Poller L., Triplett DA, Hirsh J, Carroll J, Clarke K (1995) The value of plasma calibrants in correcting coagulometer effects on International Normalised Ratios (INR): An international multicentre study, Amer. J. Clin. Pathol, 103: 358-365. 8. Poller L, Triplett DA, Hirsh J, Carroll J, Clarke K (1995) A comparison of lyophilised artificially depleted plasmas and lyophilised plasmas from warfarin treated patients in correcting for coagulometer effects on International Normalised Ratios, Amer. J. Clin. Pathol, 103: 366-371. 9. Keeling D (2011) Guidelines on Oral Anticoagulation with warfarin: Forth Edition, British Journal of Haematology, 154(3): 311-324. POUŽITÉ SYMBOLY REF Katalogové číslo CE značka – vyhovuje směrnici 98/79/EC LOT Číslo šarže IVD In Vitro Diagnostics Datum exspirace (poslední den v měsíci) Čtěte návod k použití Výrobce Teplota skladování Erba Protime LS Název výrobku CONT Obsah